原文標(biāo)題：Recommendations For Sampling And Shipment Of Materials For PCR-Tests For Surveillance Of PRRS-Virus In Danish Herds
目的和意義
2022年丹麥啟動(dòng)了一個(gè)旨在降低本土豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）流行率的項(xiàng)目。為了凈化PRRS病毒，需要進(jìn)行更多的RT-qPCR檢測(cè)，這些檢測(cè)需要用到多種樣本材料，如處理液（Processing Fluid，PF）、舌尖液（Tongue Tip Fluid，TTF）和口腔液（oral fluid，OF）等。該項(xiàng)目目的是開(kāi)發(fā)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的建議，指導(dǎo)如何最佳地采集、儲(chǔ)存和運(yùn)輸用于檢測(cè)PRRSV的不同樣本，從而避免出現(xiàn)假陰性的檢測(cè)結(jié)果。
材料與方法
通過(guò)向陰性樣本材料中添加PRRSV-1細(xì)胞培養(yǎng)分離株，來(lái)研究?jī)?chǔ)存溫度和時(shí)間對(duì)口腔液（OF）和處理液（PF）中PRRSV RNA穩(wěn)定性的影響。這些注入了病毒的材料在不同溫度和時(shí)間條件下儲(chǔ)存，最后通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)提取的病毒RNA，以監(jiān)測(cè)不同過(guò)程的影響。
結(jié) 果
結(jié)果表明，在4°C、-20°C和-80°C下儲(chǔ)存血清、口腔液（OF）和處理液（PF）長(zhǎng)達(dá)30天，對(duì)RT-qPCR的Cq值影響較小。一輪凍融對(duì)Cq值影響也不大，但經(jīng)過(guò)2-3輪反復(fù)凍融后對(duì)口腔液（OF）樣品的負(fù)面影響更為明顯。相比之下，在室溫下儲(chǔ)存僅一天就會(huì)導(dǎo)致所有樣本的Cq值顯著增加，這表明對(duì)PRRSV的檢測(cè)能力受到了嚴(yán)重影響。
討論和結(jié)論
正確處理PCR檢測(cè)樣本對(duì)于避免假陰性檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。根據(jù)本研究的結(jié)果，我們建議處理液（PF）和舌尖液（TTF）樣品應(yīng)在采樣后立即冷凍至-20°C，然后在使用樣本之前在溫度4-8°C下解凍。此前，我們還發(fā)現(xiàn)在室溫下儲(chǔ)存血清會(huì)產(chǎn)生相對(duì)明顯的負(fù)面影響，因此我們建議在采樣后盡快將所有用于RT-qPCR的樣品進(jìn)行冷卻。樣品在運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室的過(guò)程中也應(yīng)保持冷鏈運(yùn)輸，如使用泡沫箱，添加冰袋等。
來(lái)源：IPVS 2024
