本研究旨在評(píng)估不同的樣品采集方案和細(xì)胞系，以便從圍產(chǎn)期死亡仔豬（包括死胎和出生后24小時(shí)內(nèi)死亡的新生仔豬）的舌尖液（TF）中成功分離出豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）。
研究方法：
在4天內(nèi)，從5,000頭PRRSV陽性繁殖群中的597頭圍產(chǎn)期死亡豬只中采集樣本。將舌頭組織分成20組（每組約30頭死亡仔豬或舌組織）。每塊舌組織被切成四份，每份隨機(jī)采用以下四種采集方法之一：
1) 使用磷酸鹽緩沖液 (PBS) 從新鮮組織中提取TF；
2) 使用病毒運(yùn)送培養(yǎng)基 (VTM) 從新鮮組織中提取 TF；
3) 經(jīng)過一次凍融循環(huán)后在PBS中提取 TF（凍融）；
4) 使用舌頭組織勻漿（勻漿）
這樣總共得到了80個(gè)樣本（20組 x 4種方案），全部送往NAHLN批準(zhǔn)的獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行RT-qPCR測(cè)試。我們計(jì)算了每組四種方法的RT-qPCR循環(huán)閾值（Ct）值的平均值，并選擇平均Ct值最低的10個(gè)批次進(jìn)行病毒分離 （VI）。測(cè)試了兩種細(xì)胞系 (ZMAC和MARC-145) 和一批原代肺泡巨噬細(xì)胞（PAM）對(duì)PRRSV成功分離的影響。
研究結(jié)果：
所有樣本經(jīng)RT-qPCR檢測(cè)均為PRRSV陽性；PBS、VTM、凍融和勻漿組的平均Ct值分別為21.9、21.8、22.6和24.8。
我們成功地從所有組的舌組織中分離出了PRRSV，但成功率各不相同。使用PBS的組別病毒分離成功率為22.6%，VTM組為12.1%，而凍融和勻漿組都只有2.8%。在MARC-145細(xì)胞中成功分離病毒的概率為3.1%，在ZMAC細(xì)胞中為21.0%，在PAM細(xì)胞中為4.8%。只有死胎的組別有35.5%的成功分離PRRSV的概率，而同時(shí)包含死胎和死亡新生仔豬的批次只有1.0%。
行業(yè)啟示：
我們可以從死亡后仔豬的舌液中分離出PRRSV。從死胎中提取TF，使用PBS或VTM可以提高成功分離病毒的幾率。在本研究中，ZMAC細(xì)胞系的表現(xiàn)優(yōu)于MARC-145細(xì)胞系和PAM細(xì)胞。確保從樣本采集到到達(dá)實(shí)驗(yàn)室的冷鏈可保持樣本的診斷質(zhì)量。從TF等聚集樣本中分離PRRSV可提供多種監(jiān)測(cè)和疫苗開發(fā)益處。使用聚集樣本進(jìn)行病毒分離可有效同時(shí)檢測(cè)豬群中的多種PRRSV菌株（如果存在），這對(duì)監(jiān)測(cè)和開發(fā)自源疫苗具有很大的優(yōu)勢(shì)。
來源：https://www.swinehealth.org/results/
