豬圓環(huán)病毒病在豬場(chǎng)普遍存在。圓環(huán)病毒感染后不僅會(huì)引發(fā)豬只生長(zhǎng)遲緩、飼料轉(zhuǎn)化率降低，作為一種免疫抑制性疾病，豬圓環(huán)病毒還會(huì)破壞豬免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致豬只抵抗力下降，從而引發(fā)繼發(fā)感染藍(lán)耳病病毒、豬肺炎支原體等其他病原，使病情更加復(fù)雜，給豬場(chǎng)造成巨大損失。
近年來，豬圓環(huán)病毒變異等問題，給防控帶來了新的挑戰(zhàn)。5月20日，碩騰特邀華南農(nóng)業(yè)大學(xué)博導(dǎo)、國(guó)家生豬種業(yè)技術(shù)研究中心豬病功能實(shí)驗(yàn)室主任宋長(zhǎng)緒研究員，碩騰戰(zhàn)略客戶技術(shù)服務(wù)經(jīng)理胡群山博士，就當(dāng)前豬圓環(huán)病毒的流行現(xiàn)狀以及如何破解豬圓環(huán)病毒2型防控難題等進(jìn)行分享解答。
本文分享豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）疫苗的選擇與評(píng)估。
臨床上圓環(huán)疫苗免疫存在哪些問題？
胡群山：涉及到免疫，我想跟大家分享幾個(gè)方面。首先，感染評(píng)估要標(biāo)準(zhǔn)。僅僅依靠實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)來判斷感染情況是常見誤區(qū)，抗原抗體陽性率監(jiān)測(cè)具有參考價(jià)值，但需結(jié)合變化規(guī)律與臨床評(píng)估。比如說，40-120日齡階段應(yīng)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)漸進(jìn)性消瘦、被毛粗亂、腹股溝淋巴結(jié)腫大等體征，同時(shí)追蹤斷奶后死亡率、僵豬比例及飼料轉(zhuǎn)化率變化（典型感染可使料肉比上升0.1-0.3）。這種多維評(píng)估體系能更準(zhǔn)確反映病毒的實(shí)際影響。
第二就是關(guān)于疫苗選擇。目前市面上疫苗種類繁多，不同工藝、毒株、佐劑及生產(chǎn)商差異導(dǎo)致疫苗效果參差不齊。價(jià)格并非唯一考量因素，高價(jià)疫苗貴但質(zhì)量穩(wěn)定，而低價(jià)產(chǎn)品可能就便宜這一個(gè)優(yōu)勢(shì)。值得注意的是，單純檢測(cè)疫苗抗原含量無法預(yù)測(cè)實(shí)際保護(hù)效果，尤其是對(duì)生產(chǎn)成績(jī)的改變無法評(píng)估，需結(jié)合中和抗體持續(xù)時(shí)間、整齊度、抗體滴度及細(xì)胞免疫水平等綜合指標(biāo)來評(píng)價(jià)。
另外一個(gè)誤區(qū)就是免疫程序的制定，存在三個(gè)問題。1、首免時(shí)機(jī)不當(dāng)，太早易受母源抗體干擾，太晚容易導(dǎo)致免疫空窗期，需根據(jù)母源抗體衰減規(guī)律動(dòng)態(tài)調(diào)整；2、二免間隔過長(zhǎng)或過短，不是所有的豬都需要二免，要根據(jù)感染壓力、感染時(shí)間來評(píng)估；3、免疫時(shí)間與病毒活躍期不匹配是常見問題，理想方案應(yīng)在病毒活躍高峰期前3-4周完成免疫程序，或者二免要在這個(gè)時(shí)間點(diǎn)完成，假如說一免或者二免錯(cuò)過這個(gè)時(shí)間，效果就會(huì)差很多。
圓環(huán)疫苗的選擇與免疫的時(shí)機(jī)
宋長(zhǎng)緒：在圓環(huán)病毒疫苗問世前，特別是2005年之前，該病的防控曾長(zhǎng)期困擾養(yǎng)豬業(yè)。保育階段豬群普遍出現(xiàn)呼吸道癥狀、漸進(jìn)性消瘦等問題，死亡率可達(dá)30%-40%，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。疫苗問世以后，這個(gè)問題迎刃而解，其免疫效果顯著優(yōu)于多數(shù)常規(guī)疫苗。當(dāng)前商用疫苗主要分為全病毒滅活疫苗和亞單位疫苗兩大類，后者包括重組桿狀病毒疫苗及大腸桿菌表達(dá)亞單位疫苗兩大類。
關(guān)于疫苗應(yīng)用策略，行業(yè)存在一定差異，部分豬場(chǎng)僅免疫仔豬，另有部分僅免疫母豬，極少數(shù)育肥場(chǎng)仍維持不免疫方案。基于病毒傳播特性和經(jīng)濟(jì)學(xué)分析，正確免疫應(yīng)母豬與仔豬都免，而且免疫母豬是優(yōu)先的，也更合算。
值得注意的是，母源抗體水平直接影響仔豬免疫時(shí)機(jī)，若母豬未免疫，仔豬需提前至10日齡左右接種以應(yīng)對(duì)早期感染風(fēng)險(xiǎn)；反之，高水平母源抗體可適當(dāng)推遲仔豬免疫至保育中后期或育肥初期。具體免疫程序需結(jié)合抗體監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)動(dòng)態(tài)調(diào)整。
應(yīng)該如何科學(xué)評(píng)價(jià)一款圓環(huán)疫苗呢？
宋長(zhǎng)緒：其實(shí)在疫苗生產(chǎn)過程中，廠家已經(jīng)進(jìn)行了評(píng)估，包括抗原含量等質(zhì)控手段。在生產(chǎn)層面，可以通過生產(chǎn)成績(jī)，包括料肉比、增重、發(fā)病情況甚至排毒情況去監(jiān)測(cè)。
實(shí)驗(yàn)室評(píng)估有很多辦法，如抗原定量、抗體水平監(jiān)測(cè)等。中和抗體檢測(cè)作為核心評(píng)估方法面臨技術(shù)難點(diǎn)，怎么避免母源抗體干擾、首次免疫后抗體對(duì)后續(xù)免疫的影響等都是豬場(chǎng)比較關(guān)心的問題。
機(jī)緣巧合下，我們實(shí)驗(yàn)室針對(duì)幾種疫苗做了中和抗體的實(shí)驗(yàn)（中和抗體檢測(cè)采用改良間接免疫熒光法，設(shè)定90%感染阻斷率為有效閾值）。本次實(shí)驗(yàn)針對(duì)性地選取100余頭豬（在一免和二免的空檔期間），最終確定60頭圓環(huán)病毒抗體陰性的實(shí)驗(yàn)豬，分設(shè)6組（5個(gè)疫苗組，1個(gè)對(duì)照組）。實(shí)驗(yàn)之前，豬群的抗體水平基本上都是陰性的，把中和抗體和第一次免疫的干擾基本上排除了。
0周免疫后，在第2、4、6、8、10周分別進(jìn)行采血檢測(cè)。ELISA數(shù)據(jù)顯示，陰性對(duì)照組至第8周出現(xiàn)輕微抗體上升，提示存在自然感染，而各疫苗組抗體水平均顯著優(yōu)于對(duì)照組。碩騰疫苗組（ZO組）表現(xiàn)突出，免疫2周后中和抗體產(chǎn)生快，效價(jià)達(dá)1:64以上，僅個(gè)別為1:16，整齊度很高，免疫后4周中和抗體效價(jià)仍優(yōu)于其他疫苗。
對(duì)比組中A組初期效價(jià)提升較緩，4周后逐漸接近碩騰組，而D組在4周后效價(jià)顯著下降，呈現(xiàn)明顯分化趨勢(shì)。第8周實(shí)驗(yàn)豬經(jīng)歷轉(zhuǎn)欄應(yīng)激后，碩騰組與A組抗體水平仍保持穩(wěn)定，而部分疫苗組在10周觀察期內(nèi)出現(xiàn)顯著效力衰減。
同時(shí)在另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，揚(yáng)州大學(xué)商教授做的一個(gè)細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)（成果發(fā)表在疫苗學(xué)頂刊Npj vaccines雜志上），通過檢測(cè)免疫后CD4+陽性T細(xì)胞數(shù)量變化發(fā)現(xiàn)，碩騰疫苗組在免疫后14天表現(xiàn)出最顯著的T細(xì)胞增殖效應(yīng)，與前述中和抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果形成雙重驗(yàn)證。
圓支二聯(lián)苗免疫與單苗混合免疫有什么區(qū)別？
宋長(zhǎng)緒：圓環(huán)病毒與支原體作為兩大重要經(jīng)濟(jì)性疾病，早期免疫實(shí)踐中，豬場(chǎng)多采用圓環(huán)單苗與支原體單苗分點(diǎn)接種或同時(shí)免疫，甚至有些豬場(chǎng)自行混苗操作。隨著技術(shù)進(jìn)步，專業(yè)化的圓-支二聯(lián)苗逐漸成為趨勢(shì)，其通過工業(yè)化生產(chǎn)工藝優(yōu)化實(shí)現(xiàn)抗原穩(wěn)定性提升，由于現(xiàn)場(chǎng)操作中，單苗混合存在配比誤差、佐劑兼容及人員操作差異等問題，標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的二聯(lián)苗表現(xiàn)更優(yōu)。
胡群山：我的判斷和宋老師是一致的，圓環(huán)疫苗將來的方向一定是二聯(lián)苗，這是個(gè)趨勢(shì)。部分豬場(chǎng)從單苗轉(zhuǎn)向二聯(lián)苗后又回歸單苗的現(xiàn)象，主要源于兩個(gè)關(guān)鍵因素：其一，原用二聯(lián)苗中支原體組分質(zhì)量不達(dá)標(biāo)，導(dǎo)致免疫效果劣于優(yōu)質(zhì)單苗；其二，二聯(lián)苗生產(chǎn)工藝并非簡(jiǎn)單混合抗原與佐劑，需解決抗原兼容性、抗體干擾等技術(shù)難題。例如，支原體培養(yǎng)過程中殘留的圓環(huán)病毒抗體若未被有效清除，與圓環(huán)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物將顯著降低疫苗效力。
因此我建議，選擇經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證的二聯(lián)苗（如碩騰瑞圓舒）可有效規(guī)避上述問題，把優(yōu)秀的二聯(lián)苗用好，完全沒有問題。
瑞圓舒作為圓支二聯(lián)苗的技術(shù)優(yōu)勢(shì)是什么？
胡群山：宋老師介紹了疫苗評(píng)價(jià)的兩種準(zhǔn)確但難度較高的方法，即中和抗體檢測(cè)與細(xì)胞免疫評(píng)估。在實(shí)際選擇疫苗時(shí)需綜合考慮多方面因素，不同疫苗類型在免疫效果上可能存在顯著差異，例如滅活疫苗對(duì)母豬及育肥豬的保護(hù)力優(yōu)于基因工程疫苗。佐劑常見類型包括水佐劑、油佐劑及雙佐劑系統(tǒng)，其中具備專利技術(shù)的佐劑研發(fā)門檻較高。
除了抗原含量之外，還要關(guān)注抗原的質(zhì)量。比如疫苗滅活工藝，會(huì)不會(huì)破壞抗原結(jié)構(gòu)完整性，以及抗原純度、類病毒顆粒組裝等指標(biāo)。保護(hù)期作為關(guān)鍵參數(shù)存在顯著差異，文獻(xiàn)顯示不同疫苗保護(hù)期從90天至150天不等。
碩騰瑞圓舒（圓支二聯(lián)）不是簡(jiǎn)單的把圓環(huán)病毒和支原體混合在一起，碩騰團(tuán)隊(duì)歷時(shí)十年突破多項(xiàng)技術(shù)瓶頸，通過PCV1-2嵌合技術(shù)提升抗原質(zhì)量；改進(jìn)支原體抗原制備工藝，創(chuàng)新性去除支原體組分中的圓環(huán)病毒抗體，并配套開發(fā)專利雙佐劑系統(tǒng)，最終實(shí)現(xiàn)兩種抗原的協(xié)同增效。
首先在抗原選擇方面，采用基因工程手段將PCV1和PCV2嵌合后滅活制成疫苗，不僅保證了種毒穩(wěn)定性與高培養(yǎng)效率，還通過豬源細(xì)胞系培養(yǎng)確保了抗原構(gòu)象完整性和安全性，避免了外源病毒污染風(fēng)險(xiǎn)。
針對(duì)支原體與圓環(huán)病毒組份兼容性問題（研究發(fā)現(xiàn)支原體全菌體抗原與圓環(huán)病毒直接混合會(huì)降低免疫效果，同時(shí)支原體培養(yǎng)過程中使用的豬血清常含有圓環(huán)病毒抗體），通過技術(shù)手段去除干擾抗體后成功解決了兩個(gè)抗原兼容的問題。
佐劑優(yōu)化環(huán)節(jié)通過大量實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，盡管艾弗金及其復(fù)合佐劑在單一抗原中表現(xiàn)優(yōu)異，但專為雙組份疫苗研發(fā)的MetaStim佐劑在攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出最佳效果，其免疫應(yīng)答曲線和病變控制數(shù)據(jù)顯著優(yōu)于其他方案。
生產(chǎn)工藝方面特別注重實(shí)驗(yàn)室成果向規(guī)?；a(chǎn)的轉(zhuǎn)化，通過工藝優(yōu)化確保了大批量產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性。
最后，關(guān)于疫苗評(píng)估，可以根據(jù)實(shí)際條件，構(gòu)建評(píng)估模型，并在評(píng)估開始前就確定好重點(diǎn)關(guān)注的點(diǎn)，比如涵蓋安全性、抗體水平、攻毒保護(hù)、免疫持續(xù)期等核心指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合生產(chǎn)數(shù)據(jù)中的成活率、日增重、正品率、飼料轉(zhuǎn)化率等經(jīng)濟(jì)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮全同胞分組、精準(zhǔn)飼喂計(jì)量等條件限制，現(xiàn)場(chǎng)能否匹配？另外就是要考慮到實(shí)驗(yàn)中豬發(fā)病等特殊情況的處理，更重要的是，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理要科學(xué)。
我們的實(shí)驗(yàn)包含15個(gè)專項(xiàng)表格的管理體系，從人員分工、接種記錄到數(shù)據(jù)采集形成完整閉環(huán)，部分大型田間實(shí)驗(yàn)甚至需要持續(xù)半年至一年，花費(fèi)大量人力、物力。國(guó)際上多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，瑞圓舒可使肺臟病變?cè)u(píng)分降低0.23，屠宰肺損率顯著下降，死亡率降低1.16%，日增重提升24.5克（折合出欄體重增加4.5公斤），減少傳染性胸膜肺炎的比例，飼養(yǎng)周期縮短2.8天，在疾病復(fù)雜地區(qū)表現(xiàn)更為突出。
